肝损伤是临床常见的危害人类健康的疾病.现代医学并无治疗肝损伤的特异性药物, 多采用休息、加强营养、补充维生素和对症治疗等, 严重者需被迫终止用药, 以免加重肝损伤。中医药经过几千年的发展研究, 对肝损伤有一定的促再生和修复作用, 因此运用中医药综合治疗作用, 来减轻或控制非暴力性肝损伤的发生, 应当是一种既有效而又切实可行的治疗思路。本实验采用中药虎杖来研究对CCl4 诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。
虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.etZucc., 的干燥根茎和根。《本草述》记载:虎杖之主治, 其行血似与天名精类, 其疗风似与王不留行类, 第前哲多谓其最解暑毒, 是则从血所生化之原以除结热, 故手厥阴之血脏与足厥阴之风脏, 其治如鼓应桴也。方书用以疗痉病者, 同于诸清热之味, 以其功用为切耳, 然于他证用之亦鲜, 何哉? 方书用以治淋, 即丹溪疗老人气血受伤之淋, 亦以为要药, 于补剂中用之矣。谓虚人服之有损者, 与补剂并行, 其庶几乎。主治功效一般认为是:活血散痰、祛风解毒、消炎止痛、去湿热黄疸、治慢性气管炎、降低血脂等功效。现代药理学研究虎杖浓缩片发现其具有保护肝组织的作用。本实验采用虎杖提取物对CCl4 诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用进行了观察。
1 材料与方法
1.1 动物
健康清洁级雄性IC R 小鼠(18 ～ 20g)由浙江省医学科学院动物中心提供(动物合格证号:2001001)。
1.2 虎杖提取物的制备
虎杖加8倍量水, 回流提取3 次, 每次1h , 合并, 抽滤, 浓缩至含生药0.5gmL-1 。
1.3 试剂与仪器
1.3.1 试剂:CCl4 分析纯, 用时以橄榄油配成0.2%溶液。ALT、AST 、MDA、SOD、考马斯亮蓝试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
1.3.2 仪器:电子天平:AB104-N 型, 瑞士METTLERTOLEDO 公司, 离心机:80-2B 型, 上海安亭科学仪器厂, 半自动生化仪:738PLUS 型, 上海安泰分析仪器有限公司。
1.4 实验方法
取60只雄性ICR 小鼠随机分成六组, 每组10 只, 分为正常组、模型组、阳性药组、虎杖提取物高、中、低剂量组。正常组及模型组给予生理盐水, 阳性组给予联苯双酯200mgkg -1 , 虎杖提取物高剂量、中剂量、低剂量, 灌胃给药, 每天1 次, 连续7d 。于末次给药1h 后, 正常组给予腹腔注射生理盐水, 其余组给予腹腔注射0.2 % CCl4 溶液10m Lkg -1 。12h 后摘眼球取全血, 取肝脏。
1.5 指标测定
1.5.1 血清AST 、ALT 测定:全血离心后, 取上清液, 按照试剂盒进行测定。
1.5.2 肝脏MDA 、SOD 的测定:称取肝脏0.2 ～ 0.4g , 加冷生理盐水9 倍, 匀浆, 离心后去上清液, 按试剂盒说明书进行测试, 同时采用考马斯亮蓝法测定蛋白含量。
1.6 统计学处理
数据以x s 表示, 用t-test 检验差异的显著性。
2 结果
2.1 虎杖提取物对CCl4 急性肝损伤小鼠血清ALT , AS T 的影响 与正常组比较, CCl4 急性肝损伤小鼠血清ALT , AST显著的升高(P 给予虎杖提取物后, AST 、ALT 均显著性下降, 尤其是高剂量组与中剂量组与阳性药相似, 具有较强的降低作用。
2.2 虎杖提取物对CCl4 急性肝损伤小鼠肝组织SOD 活性、MDA 含量的影响 与正常组比较, CCl4 急性肝损伤小鼠肝组织SOD 活性显著降低, MDA 含量明显上升(P 给予虎杖提取物后, 肝组织SOD 活性明显升高, MDA 含量明显降低, 尤其是高剂量组与中剂量组与阳性药相似, 具有较强的降低作用(P 0.01 )。
3 讨论
化学性肝损伤模型是目前国际上常用的肝损伤模型, 具有操作简便、病理模拟性及重复性好等优点。四氯化碳是经典的化学性肝损伤的毒剂, 被广泛应用于肝坏死及肝损伤的研究。目前, CCl4 是一种有毒环境生物损害剂, 在肝氧化代谢中可产生三氯甲基自由基, 继而攻击脂质细胞膜。造成肝细胞脂质过氧化性损伤, 本实验中给小鼠腹腔注射0.2%CCl4 溶液10 mLkg -1 , 引起小鼠血清中ALT 、AST 活力及肝组织中MDA 含量增高, 而SOD 活力明显下降, 由此可进一步说明CCl4 引起肝损伤的机制与脂质过氧化有关。中药中能预防肝损伤的很多, 陈红艳等研究发现甘草提取物能明显降低CCl4 致急性肝损伤小鼠血清ALT、AS T 活性, 降低肝匀浆中MDA 含量, 提高SOD 活性。喻宁华等研究发现仙人掌多糖可显著地抑制CCl4 引起的小鼠血清ALT 、AST 活性升高, 改善肝中毒小鼠GsH 含量及GsT 活性和GsH-Px 活性水平, 并减轻肝组织的病理变化。韩再刚等研究发现地丁草水提取物能显著降低CC14 所致小鼠血清AIJrr(P 0.01)和AS T 活性(P 0.05), 升高肝组织SOD 活性(P0.01), 降低肝组织MDA 的含量(P 0.01)。表明地丁草水提取物对CC14 所致小鼠急性肝损伤具有保护作用。本实验采用虎杖提取物来研究其保护对CC14 所致小鼠急性肝损伤。
