1、进行接种操作的相对洁净区域或房间叫无菌室或叫接种室。无菌室达到—定的无菌程度，面积—般4—6平方米，高度2—2.2米。室内地面、墙壁平整光滑，水泥墙面涂刷油漆或防水、防霉涂料，也可装贴塑面板和杀菌瓷面砖。无菌室的门要和工作台保持—定距离，通常采用左右移动拉门，有条件装用超净工作台，效果更好。
以化学灭菌消毒的无菌室称为化学灭菌无菌室。食用菌栽培大多数采用这类无菌室。用过滤空气净化环境的无菌室用于机械、物理灭菌无菌室，也称洁净室。洁净气流分层流式和乱流式两种，乱流式洁净级别低，用于工业生产。食用菌接种室常在旧建筑上改造，需增添有技术走廊的乱流洁净室。一般工作区要求空气洁净度达到100级，温度23-25℃，相对湿度50-65％，水平层流速度0.3-0.5米／秒。
2、无菌室使用注意事项
（1）使用前 ①用紫外线灭菌15-30分钟，或用5％石碳酸、3％煤酚皂液喷雾后，再开紫外线灯灭菌；②用富尔马林—甲醛熏蒸；③用臭氧发生器杀菌30分钟后。三种方法交替使用，效果更好。一般使用10-30天后，再灭菌一次。应特别重视进入无菌室前的人身净化和熟悉操作要求。
（2）灭菌效果检验 方法是在室内一定高度放置若干葡萄糖琼脂培养丛玻璃皿，顺次打开皿盖5分钟，然后盖上皿盖，连同对照的玻璃皿一起放置到温度为30℃的培养箱中培养3天，观察菌落数。每个玻璃皿内杂菌落数超过3个为不合格。若有不合格的，应检查重来，直到合格为止。
3、紫外线灭菌灯
用于灭菌的紫外线灯光装置叫紫外线灭菌灯。紫外线分长波紫外线和短波紫外线，长波紫外线用于保健治疗，短波紫外线用于灭菌。
（1）灭菌原理。紫外线灭菌是当微生物菌体被紫外线照射并吸收了紫外线后，引起细胞内的氨基酸、原浆蛋白、酯的化学变化，使细胞变性，从而导致细菌死亡。
（2）使用注意事项。紫外线属低能量的电磁辐射，穿透力很差，影响紫外线灭菌的因素有：
①空气中的尘粒与湿度。当空气中含800-900个／立方米尘粒时，灭菌效果降低20-30％；当相对湿度由33％增至56％时，灭菌效果减为原来的1／3。
②环境温度。大多数灯管设计在25-40℃条件工作，如果外界温度由27℃减低到4℃时，输出能量要减低65-80％。
③紫外线对固体的穿透力。凡可见光不能穿透的物质，紫外线亦不能穿透，对聚氯乙烯薄膜开始可以透过30％以上，但是经6小时照射后，由于薄膜变性透过率<3％，因此，用紫外线灭菌、消毒仅限于被照射的物体表面和空气。
④紫外线管要保持清洁。灯管上的灰污、油渍会减弱紫外线辐射量，应经常用酒精纱布擦净，擦后也不能触摸。灯管寿命约2000小时，必须定时更换。一般10-30平方米的房间需30瓦灯一支，照射30分钟后，挂上遮光布30分钟则效果更好，也防止对人体的危害。
4、臭氧发生器。紫外线照射空气后会产生臭氧，产生臭氧的设备称为臭氧发生器。
（1）灭菌机理。臭氧能使有机物氧化分解，是很有效的灭菌剂。臭氧灭菌的气体扩散作用，对密闭的箱室内部无灭菌死角，所以灭菌速度比紫外线快1-2倍，比药物快8-12倍。臭氧灭菌无残毒，只需30-40分钟臭氧就能自行还原成氧气。对食用菌的生长和生育抑制也有效。
（2）常用机型。国产常用的臭氧灭菌器有FCY系列环境消毒灭菌器和MQ系列消毒灭菌器。SS-2801系列空气净化器属于空气高压电晕放电产生负离子和臭氧的设备，风速为1-2米／秒，适用于为接种室提供灭菌空气、菇房灭菌、食品短期保鲜、人防工程空气净化等。
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